病理学检查是癌症确诊和分型的主要手段之一。以淋巴瘤为代表，需要检测患者数十种生物标记物以选择合适的治疗方案。足量、合格的组织是精准诊断的物质基础，对于无法安全切取病变组织的患者，常用空芯针穿刺进行深部病灶活检，然而穿刺样本珍贵有限，难以满足多重生物标记物检测的需求，多色荧光技术虽能实现多重标记，但需要一定的检测成本，亟需技术方案优化解决。

整体解决方案：多轮明场标记转化多重荧光图像（循环染色）

面对这些挑战，滨松公司创新性地提出了明场循环染色整体解决方案。该方案仅需一张切片，通过循环组化染色，借助明场扫描仪（如NanoZoomer S20、S360）的高精度扫描拼接技术以及图像配准软件，即可实现明场多轮标记，获得一张等价多色荧光图像。这一技术适用于肿瘤微环境的多靶标共定位分析，为预算有限且追求高性价比的用户提供了全新的选择。当然，对于追求超高性能与极致品质的用户, 滨松同时具有荧光扫描设备，可以为不同用户的需求匹配不同的整体解决方案，本篇文章主要介绍的是明场循环染色产品方案。

在上述描述中，相信您已经捕捉到了两个关键词：一张切片循环染色以及高精度图像拼接。这些关键词背后所蕴含的先进技术，正是滨松能够为您带来创新性整体解决方案的核心所在。我们深知，只有经过严谨验证的技术，才能真正满足您的需求。因此，滨松不仅提出了这一创新方案，更进行了大量的实验验证，确保每一环节都经得起实践的考验。

（如果您读到这里已经对本方案产生了浓厚兴趣，您可下拉至文末，添加工程师微信。工程师将一对一为您解答上述关键优势的核心机密。部分涉及专利保护的技术细节无法在文中展开哦~）

滨松实验室验证了石蜡切片的明场循环染色全流程操作，与传统标准免疫组化染色不同，本方案采用了可溶于有机溶剂的显色底物（如过氧化物酶底物AEC）替代传统显色剂。具体来说，实验人员首先使用可溶于有机溶剂的显色底物进行首次染色，确保图像质量合格。随后，去除盖玻片，使用特定有机溶剂对切片进行褪色处理，显微镜下确认完全褪色后，在同一张切片上更换新的靶标抗体，重复染色流程，如此循环进行，直至完成所有预定标记物的检测。最终，通过滨松NanoZoomer专用图像处理软件将多轮扫描图像进行细胞核级别的精准对齐（误差<1 μm），确保不同标记物准确共定位，最终将多张明场图像，输出等效于一张多色荧光的合成图像。

• 某客户使用滨松一体化产品方案，将癫痫病人的脑组织单张切片，顺次进行两次AEC显色+一次DAB显色，组化图像叠加转化一张三标四色的图像，合成图像获得了客户认可好评。

图1 脑组织，明场图像合成四色荧光图像案例

• 滨松扫描仪保证单张切片每次扫描无位置偏移，图像转荧光，图层叠加获得三色荧光图像。

图2 扁桃体，明场图像合成三色荧光图像案例

滨松的明场循环染色产品方案在病理诊断中展现出显著的优势。

首先，组化结果被广泛认为是“金标准”，不仅结果可靠，而且操作友好，易于实施。

其次，该方案能够将组织形态学结构和空间定位信息完美结合，在一张切片上反映多个靶点的表达情况及其相互关系，极大地节约了珍贵的样品。

明场循环染色产品方案技术要求：高精度图像拼接偏移量小于1 μm

我们测试了不同扫描仪的细胞核叠加后的重合效果，发现了一个常见问题：部分设备在细胞核叠加时会出现偏移和组织错位。

图3 数字全景图像的叠加测试

众所周知，一张完整的数字全景图像需要多个局部图像拼接而成，因此图像拼接是扫描仪的关键指标（图A）。为评估该指标，滨松使用了经计量院校准的黑白线对切片来测试不同扫描仪的性能，考虑到高等动物细胞核直径通常在3~10μm之间，当拼接偏差超过3μm时，细胞错位会变得尤为明显（图B）。图像拼接问题会导致扫描图像出现接缝错位或细节特征丢失等问题。结果显示，滨松NanoZoomer扫描仪的拼接偏移量小于1μm（图C），表现出优异的拼接精度，优于行业标准。这一精度不仅满足了明场循环染色产品方案的标准，还确保了图像的高质量和高精度，为病理分析提供了可靠的技术支持。

图4 A局部图像的拼接形成了数字全景图像；B黑白线对图像偏移量越大代表细胞和组织的错位程度越严重；C符合产品方案的黑白线对的拼接偏移量。

接下来，让小编为您详细介绍滨松的整体解决方案。滨松可以为您提供全方位的支持，包括：

• 产品应用技术支持：专业的技术支持团队，确保方案顺利实施。

• 经验证的实验试剂：提供高质量的实验试剂，保证实验结果的可靠性。

• 高精度扫描设备：滨松的数字切片扫描仪，满足高精度图像拼接需求。

• 病理分析软件：支持按需选配软件相应模块功能，满足不同用户的需求。

特别值得一提的是，滨松中国已经将总部核心技术引入中国，完成了S360和S20的国产化。这两款设备均可作为国产设备出售，其扫描速度在市场上具有绝对优势。高通量的S360，最高可容纳360片，已通过FDA认证和NMPA注册证，满足国际国内对扫描仪的技术认证标准。面向全球市场销售的国产S20，最高可容纳20片，在海外已取得多地区注册证，获得了多国家的广泛认可。

滨松深耕数字病理产品领域多年，专注于开发和生产高质量的数字病理切片扫描仪产品，本文创新性地提出明场循环染色整体解决方案，该技术特别适用于两类关键场景：一是肿瘤微环境研究，通过单切片多轮精密扫描与图像配准，在明场设备上实现了多色荧光等效分析功能；二是珍贵样本多标检测（如脑组织、穿刺样本等）通过单张切片明场组化染色，替代了需多张切片才能实现检测的方法。

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